Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程里逐渐扩展

从第一次显现出有口内自身抗锥体到显现出有1改型冠心病诊疗疼痛的的的发展率在青极多年时期就有很好的描绘，多个口内自身抗锥体HIV的青极多年中会有70%在血清叠加后10年内患上冠心病，而随访15年的青极多年这一%提高到84%。远比之下，占诊疗1改型冠心病一半以上的改型1改型冠心病的复发有助于还并未取得充分的学术研究。

越来越多的人开始用于应于系统来并不一定1改型冠心病的的的发展：个锥体在显现出有多种口内自身抗锥体时转至第1阶段，显现出有皮质醇异常时转至第2阶段，显现出有疼痛时转至第3阶段。一些多发口内自身抗锥体HIV的个锥体，在1期和2期，的的发展较迟，并的发展为复发的1改型冠心病。我们此前描绘了一第三组在首次测定到多种口内自身抗锥体抽样后大概10年无冠心病的极迟的的发展者，这第三组病征人数极多，但构造并不明确。随后，我们断定口内自身抗原特异性CD8+T线或粒锥体催化在的的发展较迟的病征中会大体不存在，但在近期复发和长期存在的冠心病病征中会很并不容易测定到。这或许指出，与的的发展病征远比，这些病征胃溃疡催化的调控增强。

晚期学术研究指出，尽管调控性T线或粒锥体(Treg)量经常性，但冠心病病征存在一些功用缺陷，其中会还包括对IL-2的催化能力降低。此外，冠心病病征中会的物理现象CD4+T线或粒锥体或许对调控极富抵抗性，表现为物理现象T线或粒锥体的抑制作用减弱，自然产生的Treg和锥肾脏产生的可借Treg，以及抗原境遇的CD4+T线或粒锥体中会IL-2催化减弱。本学术研究的目地是描绘了CD4+调控性T线或粒锥体(Treg)在一小群极较迟的的发展者中会的构造，他们的年长为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX学术研究是一项以人群相结合的交叉学术研究，在21岁以下肺癌的病征亲人中会核对1改型冠心病的险恶原因。我们此前描绘了长期较迟的的发展者的构造，他们保持一致多重口内自身抗锥体HIV超过10年，但并未显现出有冠心病的诊疗疼痛，迟性或非顺利完成性胃溃疡。随后，10名继续保持一致无冠心病并乐意提供大量血液循环抽样的较迟的的发展者扩及T和B线或粒锥体功用比对。在目前的学术研究中会，8名迟的的发展者(SP第三组)，中会位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的口内自身抗锥体HIV。所有的与会者都保持稳定1改型冠心病的的发展的1期，尽管一些人随后失去了口内自身抗锥体对某些抗原的HIV催化，然而，一名病征已经保持稳定2期大概6年，但并未显现出有诊疗疼痛，一名病征被诊疗为冠心病，该受试者72岁，在挖掘科学研究抽样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在比对中会对该丝氨酸顺利完成了分开风险评估。分离外周血单个核线或粒锥体(PBMCs)，引入多参数流式线或粒锥体术和T线或粒锥体抑制作用次测试风险评估丝氨酸中会Treg的高频率、表改型和功用。用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴别、相关联和复出)顺利完成无全权负责聚类比对，风险评估Treg表改型。

结果：与健康丝氨酸远比，来自迟的的发展锥体的失忆CD4+T线或粒锥体的全权负责聚类看出，激活的失忆CD4+ Treg高频率提高，与糖皮质激素可借的TNFR无关蛋白(GITR)表达出有来提高有关。一名HbA1c升高的病征与的的发展较迟者和匹配的抽样远比，Treg可知有所不同。功用比对指出，与健康丝氨酸远比，来自较迟的的发展锥体的Treg介导的CD4+物理现象T线或粒锥体抑制作用微小损伤。表现为对物理现象CD4+T线或粒锥体CD25和CD134表达出有来的抑制作用提高。

由此可知1 熟悉的表改型比对看出，CD4+Treg亚改型在迟的的发展描绘符中会提高。由FlowSOM作用于的Treg一楼，聚集在来自所有丝氨酸的活CD4+CD45RA -线或粒锥体上。根据标识物表达出有来鉴别出有10个元簇:失忆T线或粒锥体_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;失忆T cell_4;CD49b失忆T线或粒锥体;HLA-DR + GITR +失忆T线或粒锥体;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)用于9个不同Treg标识作用于的10个元簇的MST。每个路由表代表人一个坦克部队(100个坦克部队)，更大的元坦克部队(10个元坦克部队)在路由表第三组周围上色。每个路由表中会的饼由此可知对此单个标识的表达出有来国际标准。(b)每个元聚类的热由此可知，以看出整锥体标识表达出有来。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)作用于由此可知，以及FlowSOM定位的每个元簇的覆盖层。(e-l)比较丰度为每个metacluster箱内线或由此可知(丰度> 0.05%)考虑到为HD和SP第三组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +失忆T线或粒锥体(h)、失忆T cell_1(i),失忆T cell_2 (j),失忆T cell_3 (k) n d CD49b失忆T线或粒锥体(l)。黄色边框代表人慈善机构SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon以此类推记号秩验。此键适用于由此可知形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

由此可知2 用于CITRUS的预测模改型证实，Treg高频率的提高是的的发展较迟的标志。国际标准除此以外(a - f)和棉花比对(g-k)比较SP与会者和匹配的HD与会者在CD4+CD45RA−T线或粒锥体上的相似之处。(a)未成熟CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社群的代表人性由此可知。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表达出有来顺利完成分离，各种类型FlowSOM社群。(b) HD(黑点)和SP(黑纹)第三组以及丝氨酸SP 606(黄色)中会CD25+ cd127的高频率汇总由此可知。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+除此以外弟集的箱内线或由此可知;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)果树簇锥形由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达出有来强度着色，箭头突出有的簇被定位为SP和HD描绘符错综复杂的不同。(j)箱内线或由此可知看出了在SP(黑纹)和HD(灰点)第三组中会，CITRUS失忆Treg_3和Treg_4的比较丰度(%)。(k)直方由此可知看出每个簇的表改型(白色)和Treg标识比较表达出有来与背景表达出有来(金色);上列，CPUTreg_3;上头一行，CPUTreg_4。背景与所有其他簇中会标识的表达出有来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon以此类推记号秩验

由此可知3 与健康献血者远比，的的发展较迟者失忆treg的GITR提高。每个失忆CD4+T线或粒锥体元簇(失忆T线或粒锥体_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;CD49b +失忆T线或粒锥体;HLA-DR + GITR +失忆T线或粒锥体;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个表达出有来标识的变异。(a,b)来自HD (a)和S (b)描绘符的表达出有来热由此可知(sp606不还包括在内)。(c,d)失忆Treg_4元簇中会所有HD(黄色)、所有SP(金色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR表达出有来串接，看出直方由此可知(c)和汇总由此可知(d)。Wilcoxon以此类推记号秩和验，p< 0.07(黄色)所有丝氨酸还包括，p< 0.05(金色)丝氨酸SP 606和匹配的HD不还包括在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR表达出有来，从国际标准除此以外，从所有HD(黄色)、所有SP(金色)和SP 606(黄色)串接，看出直方由此可知(e)和汇总由此可知(f) *p< 0.05, Wilcoxon以此类推记号秩验

由此可知4 来自较迟的的发展的CD4+ treg线或粒锥体控制物理现象CD4+T线或粒锥体的能力降低。SP第三组用金色的线或和边框对此，HD第三组用金色的线或和边框对此，黄色的线或/边框对此丝氨酸sp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T线或粒锥体顺利完成分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被标识为CFSE, Treg按观察的%试样。用抗CD3 /28微珠活化线或粒锥体，指导3过后顺利完成流式线或粒锥体术测定。(a-d)与CD4+反之亦然者比较应的treg指导(自锥体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者指导。(a,b,f) CFSE细胞分裂(a,e)和CFSE抑制作用%(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用%。用于HIV相符合(激活的响应线或粒锥体则有treg)计算抑制作用%。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

由此可知5 物理现象CD4+T线或粒锥体对较迟的的发展的T线或粒锥体活化的抑制作用更敏感。SP第三组用金色的线或和边框对此，HD第三组用金色的线或和边框对此，黄色的线或/边框对此丝氨酸sp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T线或粒锥体顺利完成分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel标识，treg按观察的%试样。用抗CD3 /28微珠活化线或粒锥体，指导3过后顺利完成流式线或粒锥体术(CD25反染)和线或粒锥体因弟比对。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者携手指导。(a,b) CFSE细胞分裂(a)和CFSE抑制作用调升(b)。(c,d) CD25抑制作用调升(c)和CD134抑制作用调升(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导中会的表达出有来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们给出有的结论是，来自较迟的的发展弟的活化失忆CD4+Treg在GITR表达出有来中会取得了扩展和珍贵，特别强调了进一步学术研究Treg在1改型冠心病风险个锥体中会的异质性的必要性。

文中出有处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28